体外受精におけるウシ卵母細胞の収集における獣医腹腔鏡の応用
ウシ卵母細胞の体外受精の収集における獣医腹腔鏡の応用。
腹腔鏡技術によって収集された卵母細胞の回収率は、卵巣から直接卵子を収集するよりも簡単です。さらに、獣医腹腔鏡検査を使用して濾胞の発達をチェックすることができます。
腹腔鏡の挿入：鈍いトロカールをカニューレに挿入し、カニューレを膣に挿入し、カニューレの前端を直腸把持を通して膣円蓋の所定の位置に配置し、次に鈍いトロカールを引き出し、ピラミッドトロカールを挿入し、角度を調整します。トロカールの方向と牛の長軸を10°の角度で少し右に向け、膣円蓋を上向きに力強く貫通させます。抵抗が急激に減少した場合は、膣円蓋に穴が開いていることを示しています。このとき、トロカールを取り出します。空気が入る音が聞こえると同時に、直腸を持っている手が腹腔の拡張を感じる場合は、ピアスの位置が正しいことを示しています。内視鏡バレル付きのステンレス鋼シースがスリーブに挿入されます。直腸の感覚によると、虫歯が小さい場合は、CO2を充填する必要があります。吸気速度は通常7〜L / minに制御する必要があります。充填されるガスの量は、牛のサイズによって異なります。"一般的には9L前後です。
卵母細胞の収集：直腸把持オペレーターは、穿刺する必要のある卵胞を決定するために、腹腔鏡と卵巣の位置を絶えず調整し、卵巣のさまざまな位置で卵胞と黄体の形状を表示する必要があります。助手は、オペレーターのパスワードと直腸に応じて画面に表示された卵胞をつかみ、穿刺針を操作し、卵胞液を採取し、少量の培養液を加えた採取チューブに卵胞液を入れます。別のアシスタントは、フットバキュームポンプの操作を担当しています。卵母細胞の喪失を防ぐために、穿刺前に真空ポンプを始動する必要があります（負圧は100mmHgである必要があります）。採取後、卵胞液を試験管ラックに5〜10分間入れます。収集管の底にある卵胞液をストローでプレートに吸い込み、光学顕微鏡で観察します。そして、検出された卵母細胞は細い管に吸い込まれます。細いチューブの両端は密閉されており、卵母細胞は成熟培養のために実験室に輸送することができます。手術終了後、内視鏡バレルを取り出し、2人の助手が牛の腹壁の両側を押して腹腔内のガスを排出します。ガスが排出されなくなったら、カニューレを取り出し、感染を防ぐために1日おきに膣をチェックします。細いチューブの両端は密閉されており、卵母細胞は成熟培養のために実験室に輸送することができます。手術終了後、内視鏡バレルを取り出し、2人の助手が牛の腹壁の両側を押して腹腔内のガスを排出します。ガスが排出されなくなったら、カニューレを取り出し、感染を防ぐために1日おきに膣をチェックします。細いチューブの両端は密閉されており、卵母細胞は成熟培養のために実験室に輸送することができます。手術終了後、内視鏡バレルを取り出し、2人の助手が牛の腹壁の両側を押して腹腔内のガスを排出します。ガスが排出されなくなったら、カニューレを取り出し、感染を防ぐために1日おきに膣をチェックします。
予防：
1.麻酔：浅すぎたり深すぎたりしないでください。効果的な麻酔は、卵母細胞を得るための卵胞穿刺の完了の前提条件です。麻酔が浅すぎると牛に痛みを感じ、手術の精度に影響を与えるため、麻酔を補う必要があります。麻酔が深すぎると、牛が安定して立ったり、横になったりすることもあり、手術にも影響を及ぼします。牛が横になっている場合は、すぐに手術を中止し、カニューレと腹腔鏡チューブをすばやく引き抜く必要があります。同時に、牛への怪我を避けるために、時間内に保定を解放するように注意を払う必要があります。
2.穿刺：直腸と大腸の穿刺を防ぐために、膣円蓋を穿刺するとき、直腸把持器は穿刺角度を正しく把持する必要があります。卵胞に穴を開けるときは、針を深く刺さないでください。そうしないと、卵巣物質が損傷して出血を引き起こします。これは卵胞液を汚染し、卵母細胞の検出に影響を与え、針と管を塞ぐだけでなく、卵巣の卵胞の発達にも影響を及ぼします。回復します。出血の場合は、卵胞穿刺を直ちに停止し、針とカテーテルおよび収集チューブを交換し、次の卵胞穿刺の前に針とカテーテルを0.01mgヘパリン/ ML生理食塩水で洗い流す必要があります。
3.卵胞液の収集：収集された卵胞液は、可能な限り一定の温度に保つ必要があります。採取後すぐに卵母細胞を検出し、FSHを含む成熟培地に入れ、細いチューブに詰めて実験室に輸送するのが最善です。通常、収穫から成熟培養のインキュベーターまでの時間は4時間を超えてはなりません。
4.スキル：この方法をうまく使用するには、優れた機器だけでなく、オペレーターが実際の操作に関する高度な知識と熟練度、および2人のアシスタントとの緊密な協力が必要です。したがって、実験操作の前に必要なトレーニングを実行する必要があります。
さらに、この方法は、若い牛から卵母細胞を事前に取得するためにも使用できるため、牛の利用期間と繁殖能力が向上し、遺伝的進歩が促進されます。この方法は、過剰排卵と孤立した卵巣の使用後に卵子源を取得するための良い方法になります。
